Проведение определения гемоглобина в крови

Проведение определения гемоглобина в крови

ГМ-6 Цена набора – 1985 руб.

Трансформирующий реагент по ТУ 9398-037-05595541-2011

Реагент предназначен для количественного определения гемоглобина в крови гемиглобинцианидным методом на спектрофотометрах (СФ), фотоэлектроколориметрах (ФЭК) и гемоглобинометрах.

Принцип метода:

Метод основан на образовании из гемоглобина стойкого соединения – гемиглобинцианида, интенсивность окраски которого пропорциональна количеству гемоглобина.

Реакция проходит в 2 этапа: под действием калия железосинеродистого гемоглобин окисляется в метгемоглобин; затем под действием цианида натрия метгемоглобин преобразуется в гемиглобинцианид.

Гемиглобинцианидный метод рекомендован Международным комитетом по стандартизации в гематологии. Метод позволяет определять все производные гемоглобина, кроме сульфгемоглобина.

Состав набора:

  • Трансформирующий реагент (1,25 г/фл.) – 10 флаконов.

Трансформирующий реагент представляет собой смесь измельченных и гомогенизированных солей калия железосинеродистого, цианида натрия и гидрокарбоната натрия.

Набор предназначен для проведения 2000 определений при расходе 5,0 мл трансформирующего реагента на один анализ.

Для проверки правильности определения гемоглобина гемиглобинцианидным методом (внутренний лабораторный контроль) необходим набор контрольных растворов гемоглобина (Диагем К), код ГМ-3.

Исследование на гемоглобин — один из самых распространенных анализов крови, его может назначить врач любой специализации — от терапевта до иммунолога. Но почему же этот анализ считается таким универсальным? Какую информацию результаты могут сообщить доктору? Чем чреваты колебания уровня гемоглобина в крови у взрослых и детей? Обо всем этом — в нашей статье.

Что такое гемоглобин и какие анализы назначаются для определения его содержания

Гемоглобин — это соединение белка и железа, окрашивающее кровь теплокровных существ в красный цвет. Гемоглобин участвует в транспортировке кислорода и углекислого газа. От уровня этого белка в крови напрямую зависят все обменные процессы, происходящие в клетках. При его нехватке пациенту ставят диагноз анемия (малокровие). Уровень гемоглобина в крови можно поднять, если включить в рацион такие продукты, как говядина, печень, молочные продукты, яичный желток, бобовые, пророщенные злаки, красные ягоды, свекольный сок.

Гемоглобин бывает физиологическим и патологическим. Физиологический гемоглобин может существовать в трех формах:

  • HbО 2 — гемоглобин и кислород, образуется в основном в артериальной крови, делает ее ярко-красной;
  • HbH — так называемый восстановленный гемоглобин, который уже «отдал» кислород клеткам;
  • HbCO 2 — гемоглобин и углекислый газ, соединение присутствует в венозной крови, придает ей вишневый оттенок.

Но существуют и патологические формы гемоглобина:

  • HbCO — соединение образуется в крови при вдыхании угарного газа, в таком состоянии гемоглобин не может соединяться с кислородом и транспортировать его;
  • HbMet — образуется из-за воздействия на организм химикатов (нитриты, нитраты, лекарства);
  • HbS — гемоглобин, деформирующий эритроциты; встречается у людей, больных дрепаноцитозом (серповидноклеточная анемия);
  • HbА — гликозилированный, или гликированный, гемоглобин, его уровень нарастает при постоянной гипергликемии (повышенный уровень сахара в крови).

Последняя форма патологического гемоглобина встречается чаще других. Ее наличие в крови однозначно указывает на сахарный диабет, даже если он протекает в скрытой форме. Те, кому такой диагноз уже поставлен, должны постоянно сдавать кровь на уровень гликозилированного гемоглобина, чтобы определить эффективность лечения.

Уровень физиологического гемоглобина в крови покажет общий анализ крови, который мы сдаем в рамках диспансеризации (кровь из пальца). Чтобы определить концентрацию HbА1С, необходимо сдать кровь на биохимический анализ (обычно речь идет о сдаче венозной крови).

Какой анализ сдавать — общий или биохимический на гликозилированный гемоглобин — в конечном итоге решает врач.

Показания к назначению анализа крови на уровень гемоглобина

Общий анализ назначают в следующих случаях: общее обследование (диспансеризация), отслеживание результатов текущего лечения, диагностика болезней крови, назначение некоторых препаратов. Кроме того, общий анализ назначают для того, чтобы отследить обменные процессы в организме, выявить потребность в каких-либо химических элементах. Также пробы крови на анализ берут в течение всей беременности.

Главная причина назначения анализа крови на гликозилированный гемоглобин — сахарный диабет. Показания к назначению: симптоматика диабета (постоянная сухость во рту, участившиеся позывы к мочеиспусканию, быстрая утомляемость, нестабильный эмоциональный фон). Кроме того, этот анализ назначают для оценки риска осложнений сахарного диабета.

Подготовка к сдаче биоматериала на анализ каждого типа имеет некоторые особенности. От того, насколько тщательно пациент будет соблюдать предписания врача, зависит достоверность и точность результатов.

Как сдавать кровь на анализ уровня гемоглобина

Общий анализ крови не требует от пациента какой-либо особенной подготовки. Сдают кровь обязательно натощак — спустя 8–12 часов после приема пищи. В период вынужденного голодания разрешается пить только простую или минеральную воду. Самое удобное время для сдачи крови на общий анализ — утренние часы.

Читайте также:  Служебный роман на работе с женатым мужчиной

Анализ крови на гликозилированный гемоглобин не требует подготовки. Его не нужно сдавать натощак, пить перед ним можно что угодно, даже некрепкий алкоголь, не нужно воздерживаться от физических или эмоциональных нагрузок, не повлияет на результат и прием лекарств (кроме препаратов от диабета). Исследование отличается большей достоверностью, чем анализ крови на сахар или тест на толерантность к глюкозе с «нагрузкой». Однако данное исследование дороже, и сдать его можно не в каждом городе.

Технология сдачи общего анализа крови знакома, пожалуй, всем. Врач берет необходимое количество крови из пальца, и через пару дней вы получаете результат. При обращении в частную медицинскую организацию данные, возможно, будут готовы быстрее. В бланке анализа содержится информация о количестве эритроцитов (в том числе концентрация гемоглобина) и лейкоцитов, СОЭ и лейкоцитарная формула (не всегда).

Кровь на гликозилированный гемоглобин обычно берут из вены. Результат можно получить через три-четыре дня, он отразит концентрацию HbА , накопившегося за три месяца (срок жизни эритроцитов). С помощью этого исследования врач определяет тип диабета, а также контролирует течение болезни. Необходимо принять во внимание существование факторов, снижающих точность результата пробы, например, недавняя серьезная кровопотеря или гемолиз.

Получив бланк с результатами, пациент может самостоятельно их оценить, сравнив определенные в ходе анализа крови показатели с нормой. Однако вероятность того, поставленный непрофессионалом диагноз будет неточен, очень велика — все-таки подобные вопросы должен решать врач.

Расшифровка результатов анализа крови на уровень гемоглобина

Количество гемоглобина, в том числе и гликозилированного, может измеряться в разных единицах — г/л, мкмоль/л, Ед/л. Концентрация гликозилированного гемоглобина (HbА1С) обычно выражается в процентах к физиологическому гемоглобину (HbА).

Нормы содержания физиологического гемоглобина

Нормальной концентрацией гемоглобина в крови мужчин считается величина от 135 до 160 г/л. Кровь женщин меньше насыщена этим веществом — от 120 до 140 г/л. У новорожденных самый высокий уровень HbА — от 180 до 240 г/л, но с каждым днем он падает. Когда ребенку исполняется год, нормой считается концентрация 110–135 г/л, затем она начинает увеличиваться и к 15 годам достигает отметки в 115–150 г/л.

У мужчин старше 45 лет норма составляет 131–172 г/л, у женщин — 117-160 г/л. У мужчин старше 65 лет показатели нормы еще ниже — 112–174 г/л.

У многих с возрастом концентрация гемоглобина начинает падать. В связи с такой тенденцией пожилые люди имеют большую склонность к анемии (малокровию) и иногда нуждаются в специальной диете, повышающей уровень HbA.

Нормы содержания гликированного гемоглобина

В норме уровень гликозилированного (гликированного) гемоглобина у мужчин, женщин (в том числе беременных) и детей не должен быть больше 6,5%. Для людей в возрасте от 45 до 65 лет нормой является показатель, не превышающий 7%. Значение между 7 и 7,5% считается удовлетворительным, но все же пациенты с таким показателем входят в группу риска — в некоторых случаях ставится диагноз «преддиабетное состояние». Для пожилых старше 65 лет нормальный уровень гликированного гемоглобина составляет 7,5%, удовлетворительный — от 7,5 до 8%.

О чем говорят отклонения от референсных значений

Те или иные колебания показателей (в обе стороны) могут говорить о наличии патологий или предрасположенности к ним.

  • Повышенный гемоглобин в бланке анализа
    Повышенный уровень гемоглобина может быть связан с сердечно-сосудистыми, кишечными или онкологическими заболеваниями. Превышение нормы часто фиксируется после переливания крови. Нехватка витамина В12 или фолиевой кислоты тоже вызывает повышение HbА.
    Но повышенный гемоглобин не всегда говорит о патологии. Люди, живущие в высокогорных областях или работающие на большой высоте (пилоты) всегда имеют повышенный уровень физиологического гемоглобина.
    Высокий уровень гликированного гемоглобина может означать развитие сахарного диабета, но точный диагноз врач может поставить только после проведения дополнительных исследований.
  • Пониженный гемоглобин в бланке анализа
    Низкая концентрация гемоглобина чаще всего вызвана неправильным питанием и образом жизни, явными или скрытыми кровопотерями (травмы, операции, болезни десен, донорство и др.). При инфекционных, аутоиммунных или каких-либо наследственных заболеваниях больной тоже может страдать пониженным HbА. В этих случаях показатель необходимо постоянно контролировать.
    Пониженный уровень гемоглобина часто фиксируется во время беременности. Именно поэтому в период вынашивания женщинам следует особенно тщательно следить за своим рационом, включая в него большое количество железосодержащих продуктов.
    Пониженный гликированный гемоглобин может быть обусловлен мощными выбросами инсулина. Такое бывает при опухоли поджелудочной железы. Долгие физические тренировки и низкоуглеводная диета тоже могут быть причинами пониженного HbА .
Читайте также:  Хлоргексидин при гингивите

Незначительные отклонения от нормы гемоглобина в крови можно скорректировать, изменив рацион и образ жизни. Однако если показатели сильно отличаются от нормальных, скорее всего, в организме протекают серьезные патологические процессы. От точности полученных результатов анализа на гемоглобин зависит правильность диагноза и эффективность последующего лечения, поэтому к выбору лаборатории нужно отнестись серьезно.

Определение гемоглобина в крови

Гемоглобин – основной дыхательный белок крови и главный компонент эритроцитов. Гемоглобин играет ключевую роль в системе дыхания организма человека: он осуществляет перенос кислорода из легких в ткани организма и углекислого газа из тканей в легкие.

Гемоглобин – это красный пигмент крови человека и животных. Подсчитано, что в одном эритроците содержится в среднем около 340 млн молекул гемоглобина. По своей химической структуре он представляет собой сложный белок, относящийся к гемопротеинам. В состав молекулы гемоглобина входят четыре субъеденицы, каждая из которых состоит из белковой части – глобина и небелковой части – гема. Молекула гема состоит из сложного гетероциклического соединения порфирина IХ, в центре которого находится двухвалентный атом железа, связанный с молекулой порфирина через атомы азота двумя валентными и двумя координационными связями. Степень окисления железа не изменяется ни при отдаче, ни при присоединении атома кислорода.

Рис. 1. Строение молекулы гемоглобина

Гемоглобины представляют собой тетрамерные белки, молекулы которых образованы различными типами полипептидных цепей, обозначаемых как α, β, γ, δ. В состав молекулы гемоглобина входят по 2 полипептидные цепи двух разных типов, каждая из которых связана с гемом.

У человека обнаружены гемоглобины различных типов, которые отличаются по химическому строению. В крови взрослого человека содержится гемоглобин А (HbA), состоящий из α2β2 цепей. В дополнение к основному типу гемоглобина HbA, в крови взрослого человека обнаружен гемоглобин A2 (HbA2). Также существует фетальный гемоглобин F (HbF), который называют гемоглобином новорожденных. В крови новорожденного ребёнка на долю фетального гемоглобина приходится около 80%. К концу первого года жизни ребёнка фетальный гемоглобин почти целиком замещается на гемоглобин А. Фетальный гемоглобин состоит из полипептидных цепей α2γ2 и отличается от гемоглобина А вторичной, третичной и четвертичной структурами.

Наличие атома железа в составе гема придаёт молекуле гемоглобина характерную красную окраску. Присоединение к гему различных химических групп сопровождается изменением окраски, на чём и основаны колориметрические методы определение концентрации гемоглобина в крови.

Для стандартных лабораторных исследований концентрации общего гемоглобина в крови наиболее приемлемы колориметрические методы определения, как наиболее дешевые, простые и быстрые в исполнении. Также используются химические и спектрофотометрические методы определения, они имеют высокую точность, но в тоже время и более высокую сложность выполнения и стоимость анализа по сравнению с колориметрическими методами.

Наиболее старым методом определения содержания гемоглобина считается метод Сали – реакция гемоглобина с соляной кислотой с образованием солянокислого гематина. Метод основан на визуальном определении содержания гемоглобина путем сравнения окраски исследуемой пробы со стандартными растворами солянокислого гематина. Погрешность метода является достаточно большой, около 30%, на результаты определения влияют многие факторы: время реакции между гемоглобином и соляной кислотой, белковый состав крови, концентрация билирубина в крови.

В крови человека гемоглобин находится в основном в виде оксигемоглобина и восстановленного гемоглобина и в небольшом количестве – метгемоглобина, карбоксигемоглобина и вердоглобина. Каждая из упомянутых форм имеет свой световой спектр поглощения. При использовании колориметрических методов определения гемоглобина возникает проблема в выборе такого химического реагента, который бы превращал все виды гемоглобина только в один продукт реакции с единым спектром поглощения.

Рис. 2. Ход определения гемоглобина в крови колориметрическим методом

Колориметрическими методами, которые при фотометрическом определении имеют наименьшую ошибку и позволяют количественно перевести разные виды гемоглобина в одну форму, являются гемиглобинцианидный, гемихромный и гемиглобиназидный методы. В настоящее время в большинстве стран в качестве стандартного, как наиболее точный и надежный, признан гемиглобинцианидный метод определения концентрации гемоглобина.

Гемиглобинцианидный метод разработан в 1936 г Драбкиным и был одобрен Международным Комитетом по стандартизации в гематологии (ICSH) в 1963 г. Принцип данного метода основан на переводе всех видов гемоглобина в одну форму – гемиглобинцианид.

Читайте также:  Венарус инструкция по применению цена отзывы таблетки

В ходе анализа образец крови помещают в трансформирующий раствор, который содержит феррицианид калия (железосинеродистый калий), цианид калия, дигидрофосфат калия и неионный детергент. Дигидрофосфат калия выполняет роль буфера, стабилизирующего значение рН раствора, при котором реакция проходит в течении нескольких минут. Детергент усиливает гемолиз эритроцитов и поддерживает белки плазмы крови в растворённом состоянии, что предотвращает помутнение раствора. Феррицианид калия окисляет все формы гемоглобина в метгемоглобин (гемиглобин), который при взаимодействии с анионами цианида образует гемиглобинцианид. Комплекс гемиглобинцианида окрашен в красный цвет, интенсивность которого прямо пропорциональна концентрации гемоглобина в пробе.

Существуют некоторые модификации состава трансформирующего реагента, в которых цианид калия заменяется на ацетонциангидрин, дигидрофосфат калия – на гидрокарбонат натрия, детергент отсутствует совсем.

Для гарантии точности метода применяют калибровочные растворы с точно установленной концентрацией гемоглобина. Калибровочные растворы гемоглобина – это высокоочищенные заменители крови человека, не содержащие примесей, искажающих результаты анализа. Существуют наборы контрольных растворов гемоглобина с различной концентрацией. Калибровочные растворы гемиглобинцианида получают, как правило, путем введения контрольного раствора в трансформирующий раствор. По данным измерения оптической плотности полученных растворов строят калибровочный график и проводят калибровку измерительного прибора.

Гемихромный метод является более современным методом определения гемоглобина, он отличается от гемиглобинцианидного метода отсутствием цианистых соединений в составе рабочего реагента и заменой их на более безопасные соединения. Гемихромный метод определения гемоглобина в крови разработан Ахрем А.А. с соавторами в 1986 г. Набор реагентов для определения гемоглобина в крови, основанный на данном методе, одобрен Комитетом по новой медицинской технике МЗ РФ и рекомендован к применению в клинико-диагностических лабораториях уже в 1998 г. гемоглобин кровь белок эритроцит

Принцип гемихромного метода основан на переводе всех форм гемоглобина в гемихром. В ходе анализа образец крови добавляют в трансформирующий раствор, который содержит жирные кислоты с феррицианидом калия или детергент додецилсульфат натрия (SDS), при этом происходит превращение гемоглобина в окисленную низкоспиновую форму – гемихром, имеющую красноватый цвет. Интенсивность окраски гемихрома прямо пропорциональна концентрации гемоглобина в пробе крови.

В перечисленных методах содержание гемоглобина в крови определяют путём измерения оптической плотности полученного раствора с помощью фотоколориметра при длине волны 540 нм (зеленый светофильтр), а расчет концентрации производят по калибровочному графику.

В качестве аналитического оборудования используются фотометры со светофильтрами, спектрофотометры, фотоэлектрические гемоглобинометры, автоматические лабораторные анализаторы. Гемоглобинометры представляют собой полуавтоматические цифровые лабораторные анализаторы, в которых после измерения оптического поглощения анализируемого раствора на дисплее сразу выдается концентрация гемоглобина в граммах на литр крови.

При определении общего гемоглобина в крови материалом для исследования является свободнотекущая капиллярная или венозная кровь; в качестве антикоагулянтов добавляются ЭДТА, гепарин, оксалат аммония или оксалат калия. Нормальные значения концентрации общего гемоглобина составляют у мужчин 130-160 г/л; у женщин; 120-140 г/л.

Помимо определения концентрации общего гемоглобина в крови, существует необходимость определения малых количеств свободного гемоглобина в образцах плазмы капиллярной крови, сыворотки венозной крови, промывных жидкостях при проведении хирургических операций. Целью определения концентрации свободного гемоглобина является:

количественная оценка внутрисосудистого гемолиза, который может приводить к развитию серьёзных заболеваний;

оценка уровня гемолиза в донорской крови и ее компонентах;

определение изменения уровня плазменного гемоглобина после воздействия различных факторов на организм человека;

измерение уровня гемоглобина в ирригационных растворах при хирургических процедурах и операциях для определения уровня кровопотери.

Для определения свободного гемоглобина широкое применение нашел бензидиновый метод, который основан на окислении бензидина свободным гемоглобином в присутствии перекиси водорода.

В ходе анализа проба сыворотки крови вносится в раствор, который содержит бензидин, перекись водорода и ацетатный буфер для поддержания требуемого уровня рН. Измеряют показатель оптической плотности раствора на спектрофотометре при длине волны 600 нм. Раствор инкубируют в течение определённого времени при постоянной температуре. Далее проводят измерения повторно и по изменению величины оптической плотности вычисляют содержание свободного гемоглобина. Содержание свободного гемоглобина в сыворотке крови здоровых людей варьирует в пределах от 0,017 до 0,045 г/л.

На сегодняшний день при определении концентрации свободного гемоглобина используются более современные методы анализа, такие как метод сканирующей и термолинзовой спектрофотометрии. В клинической лабораторной практике применяются специализированные лабораторные анализаторы, которые позволяют измерять низкий уровень гемоглобина. Данные способы исследования высокотехнологичны, менее трудоёмки, обладают высокой точностью.

Ссылка на основную публикацию
Пробиотики хилак форте
Дисбактериоз? Диарея? Нарушение микрофлоры кишечника из-за приёма антибиотиков? Метеоризм? Решить эти проблемы с кишечником помогает Хилак форте! Препарат от дисбактериоза...
Причины развития миомы матки
Миома матки – хроническое заболевание тела матки, проявляющееся ростом одного или нескольких опухолевидных узлов в ее мышечных слоях. В результате...
Причины развития судорожного синдрома при столбняке
Столбняк – это тяжёлое, но к счастью редкое раневое осложнение, которое вызывается специфическим возбудителем – бациллой столбняка, представляющей тонкую, подвижную,...
Пробирка для чего применяется
ПРОБИ́РКА, -и, род. мн. -рок, дат. -ркам, ж. Запаянная с одного конца стеклянная трубочка, употребляемая в лабораторной практике. На столе...
Adblock detector